Окра́шивание по Ста́мпу, модификация метода окрашивания по Цилю – Нильсену, используется для диагностики микроорганизмов, имеющих морфологию бруцелл. Окрашивание по Стампу является простым и недорогим методом и широко используется в ветеринарии.

История открытия

Джон Стамп начал исследовать возникновение абортов у овец в 1944 г., когда его назначили ветеринарным следователем на востоке Шотландии. Стамп изучал культуры клеток, выделенные из плацентарных тканей абортированных овец. Для идентификации бактерий Стамп использовал окрашивание по Цилю – Нильсону, но, т. к. полученные плацентарные ткани были выделены не стерильно, они были загрязнены мелким мусором, который осложнял окрашивание.

Впервые Стамп изложил новую методику окрашивания в своей статье «Энзоотический аборт у овец; передача болезни», опубликованной в 1950 г., а после, в 1968 г., – в книге «Овцеводство и болезни».

Использование метода в ветеринарии

Окрашивание бактериальных изолятов методом Стампа является классическим методом диагностики бруцеллёза в России. В 2015 г. он был описан в межгосударственном стандарте (ГОСТ 33675— 2015. Животные. Лабораторная диагностика бруцеллеза. Бактериологические методы. Москва, 2016).

Бруцеллы плохо идентифицируются классическими методами окрашивания (по Граму, по Ожешко и т. д.), т. к. не формируют спор, не образуют жгутиков, ворсинок и настоящих капсул, являются грамотрицательными бактериями и обычно не демонстрируют биполярное окрашивание; они не являются истинными кислотоустойчивыми бактериями, однако устойчивы к обесцвечиванию слабыми кислотами. Этот метод является распространённым для исследования мазков, взятых из органов (плаценты, сычуга абортированного плода и т. д.) или биологических жидкостей (крови, вагинальных мазков, желудочной жидкости абортированного плода и т. д.). Для молока и молочных продуктов метод Стампа имеет низкую чувствительность, т. к. бруцеллы в них часто присутствуют в небольших количествах, а интерпретация затрудняется присутствием липидных везикул.

Суть метода

Предварительно высушенный мазок фиксируют на пламени и окрашивают раствором карболового фуксина Циля, разведённого в 10 раз дистиллированной водой. Мазок промывают, оставляют в растворе уксусной кислоты на 30 секунд и вновь промывают. Далее окрашивают раствором метиленового синего в течение 20–30 секунд, промывают дистиллированной водой и просушивают фильтровальной бумагой. Чтобы обнаружить возбудителя бруцеллёза, требуется иммерсионный или стереомикроскоп. Микроорганизмы бруцелл в поле зрения микроскопа выглядят как красные внутриклеточные коккобациллы или палочковидные формы, тогда как другие бактерии окрашиваются в синий цвет.

При получении предварительных положительных результатов диагностику продолжают на питательных средах, т. к. методом Стампа сложно дифференцировать бруцеллы от других микроорганизмов, вызывающих аборты, таких как Chlamydophila abortus (ранее – Chlamydia psittaci) или Coxiella burnetii из-за их морфологического сходства.