Ме́тод Ци́ля – Ни́льсена, метод кислотоустойчивого окрашивания микроорганизмов. Метод разработан в 1882 г. немецкими учёными Францем Цилем и Фридрихом Нильсеном в ответ на растущую заболеваемость туберкулёзом, которая в то время была серьёзной проблемой общественного здравоохранения в Европе. Ф. Циль и Ф. Нильсен осознали необходимость создать простой и эффективный метод окрашивания, позволяющий различать 2 типа бактерий, которые вызывают туберкулёз: кислотоустойчивые палочки Коха (Mycobacterium tuberculosis) и некислотоустойчивые бактерии.

Суть метода

Метод заключался в использовании красителя красного цвета, содержащего основной фуксин и фенол, который специфически связывался со стенками клеток кислотоустойчивых бактерий, в том числе палочкой Коха (Mycobacterium tuberculosis). Разработанную ими краску наносили на термофиксированный (предварительно нагретый) мазок тестируемого образца.

После окрашивания мазок на предметном стекле обрабатывали кислотно-спиртовым обесцвечивающим средством, которое удаляет краситель с некислотоустойчивых бактерий. Кислотоустойчивые бактерии сохранят окраску; под микроскопом они имеют ярко-красный цвет. После этого мазок окрашивали метиленовым синим, для того чтобы некислотоустойчивые бактерии окрасились в контрастный синий цвет.

Метод окрашивания по Цилю – Нильсену быстро стал широко использоваться в диагностике туберкулёза и других микобактериальных инфекций. Важно отметить, что кислотоустойчивое окрашивание не является специфичным для палочки Коха (Mycobacterium tuberculosis). Поэтому могут потребоваться дополнительные анализы для подтверждения диагноза туберкулёза или других микобактериальных инфекций.

Примерами кислотоустойчивых бактерий, которые становятся красными после окрашивания методом Циля – Нильсена, являются палочка Коха (Mycobacterium tuberculosis) (возбудитель туберкулёза), палочка Хансена (возбудитель проказы) и некоторые виды родов Nocardia и Rhodococcus. Примеры некислотоустойчивых бактерий: золотистый стафилококк, вид Streptococcus pyogenes и кишечная палочка.

Модификации метода

C 1882 г. было создано множество модификаций метода окрашивания по Цилю – Нильсену. Эти модификации улучшили чувствительность и специфичность кислотоустойчивых методов окрашивания и сделали их более подходящими для использования в клинических лабораториях. К примерам модификаций относится метод окрашивания Киньюна. В нём используется более сильное первичное окрашивание и не требуется нагревание предметного стекла. Краситель Киньюна содержит больше основного фуксина и меньше фенола, чем исходный краситель Циля – Нильсена, что делает его более концентрированным и устойчивым к обесцвечиванию. Этот метод также известен как метод холодного кислотостойкого окрашивания.

Модифицированный метод Петрова тоже является модификацией метода окрашивания по Цилю – Нильсену. Он включает этап предварительной обработки для концентрации микобактерий в образце. Образец сначала обеззараживается раствором гидроксида натрия и N-ацетил-L-цистеина для удаления посторонних материалов и уничтожения других бактерий. Затем концентрированные микобактерии окрашивают с использованием традиционного метода окрашивания по Цилю – Нильсену.

Также одним из методов модификаций метода окрашивания по Цилю – Нильсену является метод Маккиавелло.