Лаборато́рные ме́тоды определе́ния липи́дов в диагно́стике атеросклеро́за, методы определения уровня липидов и их составляющих в плазме крови с помощью специального оборудования для диагностики атеросклероза.

Изолировать липопротеины низкой плотности (ЛПНП) и определить их состав наиболее точно позволяет метод ультрацентрифугирования в солевом растворе определённой плотности. Этот метод является референсным.

Многостадийное определение уровня ЛПНП в плазме крови

1) Ультрацентрифугирование в плотности 1,006 г/мл в течение 18 часов для удаления липопротеинов, богатых триглицеридами (ТГ) [(хиломикроны (ХМ) и липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП)];

2) выделение донной фракции (в плотности 1,006 г/мл) и преципитация в ней липопротеинов, содержащих аполипопротеин В (АпоВ), смесью гепарина и MgCl₂ для выделения липопротеинов высокой плотности (ЛПВП);

3) определение концентрации холестерина (ХС) в донной фракции и супернатанте референсным методом для определения общего холестерина (ОХС) (модифицированный метод Абеля-Кендалла);

4) вычисление содержания ХС ЛПНП как разности значений уровня ОХС в донной фракции и холестерина липопротеидов высокой плотности (ХС ЛПВП).

Расчётный метод

Длительность и трудоёмкость ультрацентрифугирования привели к разработке методов, более доступных для лабораторной практики. Наиболее распространённый способ определения содержания ХС ЛПНП в клинических лабораториях – расчётный. В этом случае определяют концентрацию ОХС и триглицеридов (ТГ) в сыворотке крови и концентрацию ХС ЛПВП в супернатанте после преципитации липопротеинов, содержащих АпоВ (ЛПОНП и ЛПНП), и вычисляют концентрацию ХС ЛПНП по формуле Фридвальда:

ХС ЛПНП (в мг/дл) = ОХС – ХС ЛПВП – ТГ/5,

ХС ЛПНП (в ммоль/л) = ОХС – ХС ЛПВП – ТГ/2,2.

В основе формулы лежат допущения: большая часть ТГ плазмы находится в ЛПОНП и ХМ; отношение массы ТГ/ОХС в мг в ЛПОНП равно 5:1, а в ммолях 2,2:1.

Формула Фридвальда позволяет получить значения ХС ЛПНП, сопоставимые с полученными референсным методом при ТГ < 2,3 ммоль/л. При концентрации ТГ = 2,3–4,5 ммоль/л доля правильных результатов снижается. Применение формулы при концентрации ТГ > 4,5 ммоль/л, а также при гиперхиломикронемии, гиперлипидемии III типа приводит к получению завышенных показателей содержания ХС ЛПОНП и заниженных показателей ХС ЛПНП, что не позволяет получить истинные значения уровня ХС ЛПНП.

При очень низких концентрациях ХС ЛПНП (< 1,8 ммоль/л) ХС ЛПОНП составляет относительно большую долю ОХС в крови, и переоценка уровня ХС ЛПОНП при высокой концентрации TГ > 2,3 ммоль/л вносит существенную ошибку в расчёт содержания ХС ЛПНП. Неправильный расчёт показателя ХС ЛПНП может привести к ошибочной оценке риска, особенно у пациентов с высоким и очень высоким сердечно-сосудистым риском.

ХС неЛПВП, рассчитанный как ОХС – ХС ЛПВП, представляет собой холестерин в атерогенных липопротеинах: ХС ЛПНП, ремананты и липопротеин (a). ХС неЛПВП обеспечивает более полную оценку риска, чем ХС ЛПНП, у некоторых пациентов с гипертриглицеридемией, поскольку он учитывает ремананты вместе с ХС ЛПНП и, следовательно, учитывает атерогенный потенциал остаточных липопротеинов. Ни одна из гиперлипидемий не может быть охарактеризована по ХС неЛПВП для выбора терапии, так как этот составной маркер не различает атерогенные фракции липопротеинов холестерина – ХС ЛПНП и липопротеина (а).

Разработано модифицированное уравнение Мартина – Хопкинса (Martin – Hopkins) для расчёта уровня ХС ЛПНП: ХС ЛПНП = ОХС – ХС ЛПВП – TГ/регулируемый коэффициент. Этот коэффициент динамически регулирует соотношение TГ / ХС ЛПОНП. Вместо того чтобы делить показатель содержания ТГ на фиксированный коэффициент для ХС ЛПОНП, равный 5, уравнение Мартина – Хопкинса сопоставляет ТГ каждого пациента и ХС неЛПВП в 180 измерениях в диапазоне от 3,1 до 9,5, чтобы получить персональную оценку содержания ЛПОНП в мг/дл. Эти персональные соотношения TГ/ЛПОНП были определены прямым сравнением концентраций TГ и ЛПОНП, непосредственно измеренных после отделения ЛПНП ультрацентрифугированием у более чем 130 млн человек в США [The Very Large Database of Lipids (VLDL)].

Формула Мартина-Хопкинса повышает точность определения уровня ХС ЛПНП при различных условиях, включая очень низкую концентрацию ХС ЛПНП (< 1,8 ммоль/л), и в образцах натощак. Формулу рекомендуют использовать в диапазоне концентраций TГ 2,3–4,5 ммоль/л.

Разработано приложение для смартфонов («Калькулятор холестерина ЛПНП») для автоматического расчёта уровня ХС ЛПНП по формуле Мартина – Хопкинса путём ввода показателей содержания ОХС, ХС ЛПВП и TГ пациента.

Когда концентрация ТГ превышает 4,5 ммоль/л (значение является пределом для уравнений Фридвальда и Мартина – Хопкинса), определение уровня ХС ЛПНП следует проводить прямым методом (прямое определение ХС ЛПНП). 

Методы прямого определения ХС ЛПНП

Ныне разработаны прямые ферментативные методы измерения содержания в плазме крови ХС ЛПНП, которые коммерчески доступны.

Согласно рекомендациям американской Национальной образовательной программы по холестерину (NCEP), метод определения ХС ЛПНП должен удовлетворять критериям правильности и воспроизводимости. Коэффициент вариации между сериями тестируемых образцов (случайная ошибка) не должен превышать 4 %. Общая ошибка при измерениях, рассчитываемая как сумма систематической и случайной ошибок, не должна превышать 12 %.

Гомогенные методы определения уровня ХС ЛПНП основаны на использовании различных детергентов и других химических соединений, способных специфично блокировать или солюбилизировать липопротеины для выделения из них ЛПНП. ХС ЛПНП определяют ферментативным методом в той же кювете.

Преимущество гомогенных методов состоит в полной автоматизации исследования, позволяющего достичь необходимого уровня воспроизводимости при определении уровня ХС ЛПНП. Однако данные, полученные гомогенными методами, не всегда удовлетворяют критериям истинности получаемых значений вследствие систематической ошибки, что ведёт к завышению или занижению показателей концентрации ХС ЛПНП в сравнении со значениями, полученными референсным методом ультрацентрифугирования. Тем не менее благодаря низким значениям коэффициента вариации эти методы удовлетворяют критериям NCEP для определения ХС ЛПНП: суммарная ошибка измерений не превышает 12 %.

Липопротеин (а) рекомендуют измерять с помощью иммунотурбидиметрического метода. Результаты измерения получают в нмоль/л.

Коэффициенты перевода показателей уровня липидов из одних единиц измерения в другие

Для перевода показателей содержания в плазме крови ОХС, ХС ЛПНП и ХС ЛПВП из ммоль/л в мг/дл нужно умножить значение в ммоль/л на 38,67.

Для перевода показателя содержания ТГ из ммоль/л в мг/дл следует умножить значение в ммоль/л на 88,7.

Преобразование показателей содержания липопротеина (а) из нмоль/л в мг/дл осуществляют делением величины значения на 2,15.